-
Aromaterapia Čistý prírodný esenciálny olej z listov eukalyptu na starostlivosť o pokožku tela
Metóda extrakcie alebo spracovania: destilácia parou
Destilácia Extrakčná časť: list
Krajina pôvodu: Čína
Použitie: Difúzne/aromaterapia/masáž
Trvanlivosť: 3 roky
Prispôsobená služba: vlastný štítok a krabica alebo podľa vašej požiadavky
Certifikácia: GMPC/FDA/ISO9001/MSDS/COA
Eukalyptový olej reaguje s hlienom a uvoľňuje ho, čím poskytuje okamžitú úľavu od dýchavičnosti a iných respiračných problémov. Je dostatočne silný na to, aby fungoval ako repelent proti hmyzu. Pri použití v aromaterapii poskytuje jasnosť myšlienok. Jeho terapeutické výhody sú spôsobené jeho antimikrobiálnymi, antibakteriálnymi, antiseptickými, antispazmodickými a antivírusovými vlastnosťami. Používajte eukalyptový olej proti rôznym kožným a zdravotným problémom. Obsahuje eukalyptol, známy aj ako cineol. Táto zlúčenina podporí vaše celkové zdravie a pohodu.
-
Prírodný čistý organický levanduľový esenciálny olej na aromaterapeutickú starostlivosť o pleť
Metóda extrakcie alebo spracovania: Destilácia parou
Časť destilačnej extrakcie: Kvet
Krajina pôvodu: Čína
Použitie: Difúzne/aromaterapia/masáž
Trvanlivosť: 3 roky
Prispôsobená služba: vlastný štítok a krabica alebo podľa vašej požiadavky
Certifikácia: GMPC/FDA/ISO9001/MSDS/COA
-
100% čistý prírodný organický esenciálny olej z kôry magnólie (Magnoliae Officmalis Cortex Oil) na starostlivosť o pleť
Vôňa Hou Po je okamžite horká a ostro štipľavá, potom sa postupne otvára hlbokou, sirupovou sladkosťou a teplom.
Hou Po má afinitu k elementom Zeme a Kovu, kde jeho horké teplo silno pôsobí na zostup Qi a suchú vlhkosť. Vďaka týmto vlastnostiam sa v čínskej medicíne používa na zmiernenie stagnácie a hromadenia v tráviacom trakte, ako aj na kašeľ a sipot spôsobený hlienmi upchávajúcimi pľúca.
Magnolia Officinials je opadavý strom pôvodom z hôr a údolí provincií S'-čchuan, Chu-pej a ďalších provincií Číny. Vysoko aromatická kôra používaná v tradičnej čínskej medicíne sa odlupuje od stoniek, konárov a koreňov a zbiera sa od apríla do júna. Hrubá, hladká kôra, bohatá na olej, má na vnútornej strane fialovú farbu s krištáľovým leskom.
Odborníci môžu zvážiť kombináciu Hou Po s esenciálnym olejom Qing Pi ako doplnok k vrchným tónom v zmesiach zameraných na rozpúšťanie nahromadených látok.
-
OEM balenie na mieru Prírodný olej z odnoží Macrocephalae
Ako účinné chemoterapeutické činidlo sa 5-fluóruracil (5-FU) široko používa na liečbu malígnych nádorov v gastrointestinálnom trakte, hlave, krku, hrudníku a vaječníkoch. A 5-FU je liekom prvej voľby na kolorektálny karcinóm v klinickej praxi. Mechanizmus účinku 5-FU spočíva v blokovaní transformácie nukleovej kyseliny uracilu na nukleovú kyselinu tymín v nádorových bunkách, a následnom ovplyvnení syntézy a opravy DNA a RNA, aby sa dosiahol jeho cytotoxický účinok (Afzal a kol., 2009; Ducreux a kol., 2015; Longley a kol., 2003). 5-FU však tiež spôsobuje chemoterapiou indukovanú hnačku (CID), jednu z najčastejších nežiaducich reakcií, ktorá trápi mnohých pacientov (Filho a kol., 2016). Výskyt hnačky u pacientov liečených 5-FU bol až 50 % – 80 %, čo vážne ovplyvnilo priebeh a účinnosť chemoterapie (Iacovelli a kol., 2014; Rosenoff a kol., 2006). Preto je mimoriadne dôležité nájsť účinnú liečbu CID vyvolanej 5-FU.
V súčasnosti sa do klinickej liečby CID zavádzajú neliekové aj liekové intervencie. Neliekové intervencie zahŕňajú primeranú stravu a doplnenie soli, cukru a iných živín. Lieky ako loperamid a oktreotid sa bežne používajú v protihnačkovej liečbe CID (Benson a kol., 2004). Okrem toho sa na liečbu CID v rôznych krajinách prijímajú aj etnomedicíny s vlastnou jedinečnou terapiou. Tradičná čínska medicína (TCM) je typickou etnomedicínou, ktorá sa praktizuje už viac ako 2000 rokov vo východoázijských krajinách vrátane Číny, Japonska a Kórey (Qi a kol., 2010). TCM zastáva názor, že chemoterapeutické lieky by mohli spustiť spotrebu Qi, nedostatok sleziny, dysharmóniu žalúdka a endofytickú vlhkosť, čo by viedlo k vodivej dysfunkcii čriev. Podľa teórie TCM by sa liečebná stratégia CID mala spoliehať najmä na dopĺňanie Qi a posilňovanie sleziny (Wang a kol., 1994).
Sušené koreneAtractylodes macrocephalaKoidz. (AM) aŽenšen PanaxCA Mey. (PG) sú typické bylinné lieky v čínskej čínskej medicíne s rovnakými účinkami dopĺňania Qi a posilňovania sleziny (Li a kol., 2014). AM a PG sa zvyčajne používajú ako pár bylín (najjednoduchšia forma kompatibility s čínskymi bylinkami) s účinkami dopĺňania Qi a posilňovania sleziny na liečbu hnačky. Napríklad AM a PG boli zdokumentované v klasických protihnačkových receptúrach, ako sú Shen Ling Bai Zhu San, Si Jun Zi Tang z...Taiping Huimin Heji Ju Fang(dynastia Song, Čína) a Bu Zhong Yi Qi Tang zPi Wei Lun(Dynastia Yuan, Čína) (Obr. 1). Niekoľko predchádzajúcich štúdií uviedlo, že všetky tri zloženia majú schopnosť zmierniť CID (Bai a kol., 2017; Chen a kol., 2019; Gou a kol., 2016). Okrem toho naša predchádzajúca štúdia ukázala, že kapsuly Shenzhu, ktoré obsahujú iba AM a PG, majú potenciálne účinky na liečbu hnačky, kolitídy (syndróm xiexie) a iných gastrointestinálnych ochorení (Feng a kol., 2018). Žiadna štúdia však nezaoberala účinkom a mechanizmom AM a PG pri liečbe CID, či už v kombinácii alebo samostatne.
Črevná mikrobiota sa v súčasnosti považuje za potenciálny faktor v pochopení terapeutického mechanizmu TCM (Feng a kol., 2019). Moderné štúdie naznačujú, že črevná mikrobiota hrá kľúčovú úlohu pri udržiavaní črevnej homeostázy. Zdravá črevná mikrobiota prispieva k ochrane črevnej sliznice, metabolizmu, imunitnej homeostáze a reakcii a k potlačeniu patogénov (Thursby a Juge, 2017; Pickard a kol., 2017). Narušená črevná mikrobiota priamo alebo nepriamo zhoršuje fyziologické a imunitné funkcie ľudského tela a vyvoláva vedľajšie reakcie, ako je hnačka (Patel a kol., 2016; Zhao a Shen, 2010). Výskumy ukázali, že 5-FU výrazne zmenil štruktúru črevnej mikrobioty u myší s hnačkou (Li a kol., 2017). Preto môžu byť účinky AM a PM na hnačku vyvolanú 5-FU sprostredkované črevnou mikrobiotou. Stále však nie je známe, či AM a PG samostatne alebo v kombinácii dokážu zabrániť hnačke vyvolanej 5-FU moduláciou črevnej mikrobioty.
Aby sme preskúmali účinky proti hnačke a základný mechanizmus AM a PG, použili sme 5-FU na simuláciu hnačkového modelu u myší. V tejto štúdii sme sa zamerali na potenciálne účinky jednorazového a kombinovaného podania (AP)Atractylodes macrocephalaesenciálny olej (AMO) aŽenšen Panaxcelkových saponínov (PGS), aktívnych zložiek extrahovaných z AM a PG, na hnačku, črevnú patológiu a mikrobiálnu štruktúru po chemoterapii 5-FU.
-
100% čistý prírodný esenciálny olej z Eucommiae Foliuml na starostlivosť o pleť
Eucommia ulmoides(EU) (v čínštine bežne nazývaný „Du Zhong“) patrí do čeľade Eucommiaceae, rodu malého stromu pôvodom zo strednej Číny [1]. Táto rastlina sa v Číne vo veľkom meradle pestuje kvôli svojmu liečivému významu. Z EU bolo izolovaných približne 112 zlúčenín, medzi ktoré patria lignany, iridoidy, fenoly, steroidy a ďalšie zlúčeniny. Doplnkové bylinné zloženie tejto rastliny (ako napríklad lahodný čaj) preukázalo niektoré liečivé vlastnosti. List EU má vyššiu aktivitu v porovnaní s kôrou, kvetom a plodom [2,3]. Bolo hlásené, že listy EU posilňujú pevnosť kostí a svalovú hmotu [4], čo vedie k dlhovekosti a podporuje plodnosť u ľudí [5]. Uvádza sa, že lahodný čaj vyrobený z listov EU znižuje tuk a zlepšuje energetický metabolizmus. Flavonoidné zlúčeniny (ako je rutín, kyselina chlorogénová, kyselina ferulová a kyselina kávová) vykazujú antioxidačnú aktivitu v listoch EU [6].
Hoci existuje dostatok literatúry o fytochemických vlastnostiach EU, existuje len málo štúdií o farmakologických vlastnostiach rôznych zlúčenín extrahovaných z kôry, semien, stoniek a listov EU. Táto prehľadová práca objasní podrobné informácie týkajúce sa rôznych zlúčenín extrahovaných z rôznych častí (kôry, semien, stonky a listov) EU a perspektívneho použitia týchto zlúčenín s prospešnými účinkami na zdravie s vedeckými dôkazmi, a tým poskytne referenčný materiál pre aplikáciu EU.
-
Čistý prírodný olej z Houttuynia cordata, olej z Houttuynia cordata, olej z Lchthammolum
Vo väčšine rozvojových krajín sa 70 – 95 % populácie spolieha na tradičné lieky v primárnej zdravotnej starostlivosti a z nich 85 % ľudí používa rastliny alebo ich extrakty ako účinnú látku.1Hľadanie nových biologicky aktívnych zlúčenín z rastlín zvyčajne závisí od špecifických etnických a ľudových informácií získaných od miestnych lekárov a stále sa považuje za dôležitý zdroj pre objavovanie liekov. V Indii je približne 2000 liekov rastlinného pôvodu.[2Vzhľadom na široký záujem o používanie liečivých rastlín je táto recenziaHouttuynia cordataThunb. poskytuje aktuálne informácie s odkazom na botanické, komerčné, etnofarmakologické, fytochemické a farmakologické štúdie, ktoré sa objavujú v literatúre.H. cordataThunb. patrí do čeľadeSaururaceaea je bežne známy ako chvost čínskej jašterice. Je to trváca bylina so stoloniferným podzemkom, ktorá má dva odlišné chemotypy.[3,4Čínsky chemotyp tohto druhu sa vyskytuje vo voľnej prírode a polodivokých podmienkach na severovýchode Indie od apríla do septembra.5,6,7]H. cordataje dostupný v Indii, najmä v údolí Brahmaputra v Assame a rôzne kmene Assamu ho tradične využívajú vo forme zeleniny, ako aj na rôzne liečebné účely.
-
100% čistý olej Arctium lappa od výrobcu – prírodný limetkový olej Arctium lappa s certifikátmi zabezpečenia kvality
Zdravotné výhody
Koreň lopúcha sa často konzumuje, ale dá sa aj sušiť a lúhovať do čaju. Funguje dobre ako zdroj inulínu,prebiotikumvláknina, ktorá pomáha tráveniu a zlepšuje zdravie čriev. Okrem toho tento koreň obsahuje flavonoidy (rastlinné živiny),fytochemikáliea antioxidanty, o ktorých je známe, že majú zdravotné benefity.
Okrem toho môže koreň lopúcha poskytnúť aj ďalšie výhody, ako napríklad:
Znížte chronický zápal Koreň lopúcha obsahuje množstvo antioxidantov, ako je kvercetín, fenolové kyseliny a luteolín, ktoré môžu pomôcť chrániť vaše bunky pred...voľné radikályTieto antioxidanty pomáhajú znižovať zápal v celom tele.
Zdravotné riziká
Koreň lopúcha sa považuje za bezpečný na konzumáciu alebo pitie ako čaj. Táto rastlina sa však veľmi podobá ľuľkovitým rastlinám ľuľkovitým, ktoré sú jedovaté. Odporúča sa kupovať koreň lopúcha iba od dôveryhodných predajcov a zdržať sa jeho svojpomocného zbierania. Okrem toho existuje len málo informácií o jeho účinkoch na deti alebo tehotné ženy. Pred použitím koreňa lopúcha u detí alebo ak ste tehotná, poraďte sa so svojím lekárom.
Tu sú niektoré ďalšie možné zdravotné riziká, ktoré treba zvážiť pri používaní koreňa lopúcha:
Zvýšená dehydratácia
Koreň lopúcha pôsobí ako prírodné diuretikum, čo môže viesť k dehydratácii. Ak užívate lieky na odvodnenie alebo iné diuretiká, nemali by ste užívať koreň lopúcha. Ak užívate tieto lieky, je dôležité si byť vedomý iných liekov, bylín a zložiek, ktoré môžu viesť k dehydratácii.
Alergická reakcia
Ak ste citliví alebo máte v anamnéze alergické reakcie na sedmokrásky, ambróziu alebo chryzantémy, máte zvýšené riziko alergickej reakcie na koreň lopúcha.
-
Veľkoobchodná cena 100% čistý olej AsariRadix Et Rhizoma Relax Aromatherapy Eucalyptus globulus
Štúdie na zvieratách a in vitro skúmali potenciálne protiplesňové, protizápalové a kardiovaskulárne účinky sasafrasu a jeho zložiek. Klinické skúšky však chýbajú a sasafras sa nepovažuje za bezpečný na použitie. Safrol, hlavná zložka kôry a oleja z koreňa sasafrasu, bol zakázaný americkým Úradom pre kontrolu potravín a liečiv (FDA), a to aj na použitie ako aróma alebo vôňa, a nemal by sa používať interne ani externe, pretože je potenciálne karcinogénny. Safrol sa používa pri nelegálnej výrobe 3,4-metyléndioxymetamfetamínu (MDMA), známeho aj pod pouličnými názvami „extáza“ alebo „Molly“, a predaj safrolu a oleja zo sasafrasu monitoruje americký Úrad pre boj proti drogám (Drug Enforcement Administration).
-
Veľkoobchodná cena 100% čistého esenciálneho oleja Stellariae Radix (nový) Relaxačná aromaterapia Eucalyptus globulus
Čínsky liekopis (vydanie z roku 2020) vyžaduje, aby metanolový extrakt YCH nebol nižší ako 20,0 % [2], bez špecifikovaných iných ukazovateľov hodnotenia kvality. Výsledky tejto štúdie ukazujú, že obsah metanolových extraktov vo vzorkách z voľnej prírody aj v kultivovaných vzorkách spĺňal štandardy liekopisu a medzi nimi nebol žiadny významný rozdiel. Preto podľa tohto indexu nebol zjavný žiadny rozdiel v kvalite medzi vzorkami z voľnej prírody a kultivovanými vzorkami. Obsah celkových sterolov a celkových flavonoidov vo vzorkách z voľnej prírody bol však výrazne vyšší ako v kultivovaných vzorkách. Ďalšia metabolomická analýza odhalila bohatú diverzitu metabolitov medzi vzorkami z voľnej prírody a kultivovanými vzorkami. Okrem toho bolo vylúčených 97 významne odlišných metabolitov, ktoré sú uvedené vDoplnková tabuľka S2Medzi tieto významne odlišné metabolity patria β-sitosterol (ID je M397T42) a deriváty kvercetínu (M447T204_2), o ktorých sa uvádza, že sú účinnými látkami. Medzi rozdielne metabolity boli zahrnuté aj predtým neuvedené zložky, ako napríklad trigonelín (M138T291_2), betaín (M118T277_2), fustín (M269T36), rotenón (M241T189), arktiín (M557T165) a kyselina loganová (M399T284_2). Tieto zložky zohrávajú rôzne úlohy v antioxidácii, protizápalových účinkoch, zachytávaní voľných radikálov, protinádorových účinkoch a liečbe aterosklerózy, a preto by mohli predstavovať predpokladané nové účinné látky v YCH. Obsah účinných látok určuje účinnosť a kvalitu liečiv [7]. Stručne povedané, metanolový extrakt ako jediný index hodnotenia kvality YCH má určité obmedzenia a je potrebné ďalej skúmať špecifickejšie markery kvality. Medzi divým a kultivovaným YCH existovali významné rozdiely v celkových steroloch, celkových flavonoidoch a obsahu mnohých ďalších diferenciálnych metabolitov; takže medzi nimi potenciálne existovali určité rozdiely v kvalite. Zároveň by novo objavené potenciálne aktívne zložky v YCH mohli mať dôležitú referenčnú hodnotu pre štúdium funkčného základu YCH a ďalší rozvoj zdrojov YCH.
Dôležitosť pravých liečivých surovín je v špecifickom regióne pôvodu už dlho uznávaná pre výrobu čínskych bylinných liekov vynikajúcej kvality [8]. Vysoká kvalita je základným atribútom pravých liečivých materiálov a prostredie je dôležitým faktorom ovplyvňujúcim kvalitu takýchto materiálov. Odkedy sa YCH začal používať ako liek, dlho mu dominoval divoký YCH. Po úspešnom zavedení a domestikácii YCH v Ningxii v 80. rokoch 20. storočia sa zdroj liečivých materiálov Yinchaihu postupne presunul z divokého na kultivovaný YCH. Podľa predchádzajúceho výskumu zdrojov YCH [9] a terénnym výskumom našej výskumnej skupiny existujú významné rozdiely v oblastiach rozšírenia pestovaných a divo rastúcich liečivých materiálov. Divo rastúci YCH je rozšírený hlavne v autonómnej oblasti Ningxia Hui v provincii Shaanxi, ktorá susedí s aridnou zónou Vnútorného Mongolska a centrálnej Ningxie. Najmä púštna step v týchto oblastiach je najvhodnejším biotopom pre rast YCH. Naproti tomu pestovaný YCH je rozšírený hlavne na juh od oblasti voľného rozšírenia, ako je okres Tongxin (pestovaný I) a jeho okolité oblasti, ktorý sa stal najväčšou pestovateľskou a produkčnou základňou v Číne, a okres Pengyang (pestovaný II), ktorý sa nachádza v južnejšej oblasti a je ďalšou produkčnou oblasťou pre pestovaný YCH. Okrem toho biotopy dvoch vyššie uvedených pestovaných oblastí nie sú púštnou stepí. Preto okrem spôsobu produkcie existujú aj významné rozdiely v biotope voľne rastúceho a pestovaného YCH. Biotop je dôležitým faktorom ovplyvňujúcim kvalitu rastlinných liečivých materiálov. Rôzne biotopy ovplyvňujú tvorbu a akumuláciu sekundárnych metabolitov v rastlinách, a tým ovplyvňujú kvalitu liečiv [10,11]. Preto významné rozdiely v obsahu celkových flavonoidov a celkových sterolov a v expresii 53 metabolitov, ktoré sme v tejto štúdii zistili, môžu byť výsledkom manažmentu polí a rozdielov v biotopoch.Jedným z hlavných spôsobov, akým prostredie ovplyvňuje kvalitu liečivých materiálov, je vyvíjanie stresu na zdrojové rastliny. Mierny environmentálny stres má tendenciu stimulovať akumuláciu sekundárnych metabolitov [12,13]. Hypotéza rovnováhy rastu/diferenciácie hovorí, že keď sú živiny v dostatočnom množstve, rastliny primárne rastú, zatiaľ čo keď sú živiny nedostatočné, rastliny sa prevažne diferencujú a produkujú viac sekundárnych metabolitov [14]. Stres zo sucha spôsobený nedostatkom vody je hlavným environmentálnym stresom, ktorému čelia rastliny v suchých oblastiach. V tejto štúdii je vodný stav pestovaného YCH hojnejší, s ročnými úhrnmi zrážok výrazne vyššími ako u divokého YCH (zásoba vody pre kultivovaný I bola približne 2-krát vyššia ako pre divo rastúci; kultivovaný II bola približne 3,5-krát vyššia ako pre divo rastúci). Okrem toho je pôda vo divokom prostredí piesočnatá, ale pôda na poľnohospodárskej pôde je ílovitá. V porovnaní s ílom má piesočnatá pôda slabú schopnosť zadržiavať vodu a je pravdepodobnejšie, že zhorší stres zo sucha. Zároveň bol proces pestovania často sprevádzaný zalievaním, takže stupeň stresu zo sucha bol nízky. Divoký YCH rastie v drsných prírodných suchých biotopoch, a preto môže trpieť vážnejším stresom zo sucha.Osmoregulácia je dôležitý fyziologický mechanizmus, ktorým rastliny zvládajú stres zo sucha, a alkaloidy sú dôležitými osmotickými regulátormi u vyšších rastlín [15Betaíny sú vo vode rozpustné alkaloidy kvartérne amóniové zlúčeniny a môžu pôsobiť ako osmoprotektanty. Stres zo sucha môže znížiť osmotický potenciál buniek, zatiaľ čo osmoprotektanty zachovávajú a udržiavajú štruktúru a integritu biologických makromolekúl a účinne zmierňujú škody spôsobené rastlinám stresom zo sucha [16]. Napríklad pri strese zo sucha sa obsah betaínu v cukrovej repe a Lycium barbarum výrazne zvýšil [17,18]. Trigonelín je regulátor rastu buniek a pri strese zo sucha môže predĺžiť dĺžku bunkového cyklu rastliny, inhibovať rast buniek a viesť k zmenšeniu objemu buniek. Relatívny nárast koncentrácie rozpustených látok v bunke umožňuje rastline dosiahnuť osmotickú reguláciu a zvýšiť jej schopnosť odolávať stresu zo sucha [19]. JIA X [20] zistili, že so zvyšujúcim sa stresom zo sucha produkoval Astragalus membranaceus (zdroj tradičnej čínskej medicíny) viac trigonelínu, ktorý pôsobí na reguláciu osmotického potenciálu a zlepšuje schopnosť odolávať stresu zo sucha. Ukázalo sa tiež, že flavonoidy hrajú dôležitú úlohu v odolnosti rastlín voči stresu zo sucha [21,22]. Veľké množstvo štúdií potvrdilo, že mierny stres zo sucha prispieval k akumulácii flavonoidov. Lang Duo-Yong a kol. [23] porovnávali účinky stresu zo sucha na YCH reguláciou kapacity zadržiavania vody na poli. Zistilo sa, že stres zo sucha do určitej miery inhiboval rast koreňov, ale pri strednom a silnom strese zo sucha (40 % kapacity zadržiavania vody na poli) sa celkový obsah flavonoidov v YCH zvýšil. Zároveň pri strese zo sucha môžu fytosteroly pôsobiť tak, že regulujú tekutosť a priepustnosť bunkových membrán, inhibujú stratu vody a zlepšujú odolnosť voči stresu [24,25Zvýšená akumulácia celkových flavonoidov, celkových sterolov, betaínu, trigonelínu a iných sekundárnych metabolitov u divokého YCH by preto mohla súvisieť s vysoko intenzívnym stresom zo sucha.V tejto štúdii sa vykonala analýza obohatenia dráhy KEGG na metabolitoch, u ktorých sa zistilo, že sa významne líšia medzi divým a kultivovaným YCH. Medzi obohatené metabolity patrili tie, ktoré sa podieľajú na metabolizme askorbátu a aldarátu, biosyntéze aminoacyl-tRNA, metabolizme histidínu a metabolizme beta-alanínu. Tieto metabolické dráhy úzko súvisia s mechanizmami odolnosti rastlín voči stresu. Spomedzi nich hrá metabolizmus askorbátu dôležitú úlohu v produkcii antioxidantov rastlín, metabolizme uhlíka a dusíka, odolnosti voči stresu a ďalších fyziologických funkciách [26]; biosyntéza aminoacyl-tRNA je dôležitou cestou pre tvorbu proteínov [27,28], ktorý sa podieľa na syntéze proteínov odolných voči stresu. Histidínová aj β-alanínová dráha môžu zvýšiť toleranciu rastlín voči environmentálnemu stresu [29,30]. To ďalej naznačuje, že rozdiely v metabolitoch medzi divým a kultivovaným YCH úzko súviseli s procesmi odolnosti voči stresu.Pôda je materiálnym základom pre rast a vývoj liečivých rastlín. Dusík (N), fosfor (P) a draslík (K) v pôde sú dôležitými živinami pre rast a vývoj rastlín. Organická hmota v pôde obsahuje aj N, P, K, Zn, Ca, Mg a ďalšie makroprvky a stopové prvky potrebné pre liečivé rastliny. Nadmerný alebo nedostatočný obsah živín, čiže nevyvážený pomer živín, ovplyvní rast a vývoj a kvalitu liečivých materiálov a rôzne rastliny majú rôzne požiadavky na živiny [31,32,33]. Napríklad nízky obsah dusíka podporil syntézu alkaloidov v Isatis indigotica a bol prospešný pre akumuláciu flavonoidov v rastlinách, ako sú Tetrastigma hemsleyanum, Crataegus pinnatifida Bunge a Dichondra repens Forst. Naopak, príliš veľa dusíka inhibovalo akumuláciu flavonoidov v druhoch, ako sú Erigeron breviscapus, Abrus cantoniensis a Ginkgo biloba, a ovplyvnilo kvalitu liečivých materiálov [34]. Aplikácia fosforečného hnojiva bola účinná pri zvyšovaní obsahu kyseliny glycyrhizovej a dihydroacetónu v sladkom drievku uralskom [35]. Keď aplikované množstvo prekročilo 0,12 kg·m−2, celkový obsah flavonoidov v rastline Tussilago farfara sa znížil [36Aplikácia fosforečného hnojiva mala negatívny vplyv na obsah polysacharidov v rastline rhizoma polygonati, ktorá sa používa v tradičnej čínskej medicíne [37], ale draslíkové hnojivo bolo účinné pri zvyšovaní obsahu saponínov [38]. Aplikácia hnojiva 450 kg·hm−2 K bola najlepšia pre rast a akumuláciu saponínov u dvojročného Panax notoginseng [39]. Pri pomere N:P:K = 2:2:1 bolo celkové množstvo hydrotermálneho extraktu, harpagidu a harpagozidu najvyššie [40]. Vysoký pomer N, P a K bol prospešný pre podporu rastu Pogostemon cablin a zvýšenie obsahu prchavého oleja. Nízky pomer N, P a K zvýšil obsah hlavných účinných zložiek oleja z listov stonky Pogostemon cablin [41]. YCH je rastlina tolerantná voči neplodnej pôde a môže mať špecifické požiadavky na živiny, ako sú N, P a K. V tejto štúdii bola pôda divo rastúcich rastlín YCH v porovnaní s kultivovaným YCH relatívne neplodná: obsah organickej hmoty v pôde, celkový N, celkový P a celkový K bol približne 1/10, 1/2, 1/3 a 1/3 v porovnaní s kultivovanými rastlinami. Preto by rozdiely v živinách v pôde mohli byť ďalším dôvodom rozdielov medzi metabolitmi zistenými v kultivovanom a divo rastúcom YCH. Weibao Ma a kol. [42] zistili, že aplikácia určitého množstva dusíkatých a fosforových hnojív výrazne zlepšila výnos a kvalitu semien. Vplyv živín na kvalitu YCH však nie je jasný a opatrenia na hnojenie na zlepšenie kvality liečivých materiálov si vyžadujú ďalšie skúmanie.Čínske bylinné liečivá majú vlastnosti „Priaznivé biotopy podporujú úrodu a nepriaznivé biotopy zlepšujú kvalitu“ [43V procese postupného prechodu z divokého na kultivovaný YCH sa biotop rastlín zmenil z vyprahnutej a neúrodnej púštnej stepi na úrodnú poľnohospodársku pôdu s väčším množstvom vody. Biotop kultivovaného YCH je lepší a výnos je vyšší, čo pomáha uspokojiť dopyt na trhu. Tento lepší biotop však viedol k významným zmenám v metabolitoch YCH; či to prispieva k zlepšeniu kvality YCH a ako dosiahnuť vysokokvalitnú produkciu YCH prostredníctvom vedecky podložených pestovateľských opatrení, si bude vyžadovať ďalší výskum.Simulácia kultivácie biotopov je metóda simulácie biotopových a environmentálnych podmienok divo rastúcich liečivých rastlín, založená na znalostiach dlhodobej adaptácie rastlín na špecifické environmentálne stresy [43Simuláciou rôznych environmentálnych faktorov, ktoré ovplyvňujú divo rastúce rastliny, najmä pôvodného biotopu rastlín používaných ako zdroje autentických liečivých materiálov, tento prístup využíva vedecký dizajn a inovatívny ľudský zásah na vyváženie rastu a sekundárneho metabolizmu čínskych liečivých rastlín [43]. Cieľom týchto metód je dosiahnuť optimálne opatrenia pre vývoj vysokokvalitných liečivých materiálov. Simulatívne pestovanie biotopov by malo poskytnúť efektívny spôsob pre vysokokvalitnú produkciu YCH, a to aj v prípade, že farmakodynamický základ, markery kvality a mechanizmy reakcie na faktory prostredia nie sú jasné. Preto navrhujeme, aby sa vedecký návrh a opatrenia na manažment poľa pri pestovaní a produkcii YCH vykonávali s ohľadom na environmentálne charakteristiky voľne žijúceho YCH, ako sú suché, neúrodné a piesočnaté pôdne podmienky. Zároveň dúfame, že výskumníci vykonajú hlbší výskum funkčného materiálového základu a markerov kvality YCH. Tieto štúdie môžu poskytnúť efektívnejšie kritériá hodnotenia YCH a podporiť vysokokvalitnú produkciu a udržateľný rozvoj odvetvia. -
Bylinný olej Fructus Amomi Prírodné masážne difuzéry 1 kg vo veľkom Esenciálny olej Amomum villosum
Čeľaď Zingiberaceae priťahuje v alelopatickom výskume čoraz väčšiu pozornosť kvôli bohatému obsahu prchavých olejov a aromatičnosti svojich druhov. Predchádzajúci výskum ukázal, že chemikálie z kurkumy Curcuma zedoaria (zedoary) [40], Alpinia zerumbet (Pers.) BLBurtt & RMSm. [41] a Zingiber officinale Rosc. [42] z čeľade zázvorovitých majú alelopatické účinky na klíčenie semien a rast sadeníc kukurice, šalátu a paradajok. Naša súčasná štúdia je prvou správou o alelopatickej aktivite prchavých látok zo stoniek, listov a mladých plodov A. villosum (člen čeľade Zingiberaceae). Výťažok oleja zo stoniek, listov a mladých plodov bol 0,15 %, 0,40 % a 0,50 %, čo naznačuje, že plody produkovali väčšie množstvo prchavých olejov ako stonky a listy. Hlavnými zložkami prchavých olejov zo stoniek boli β-pinén, β-felandrén a α-pinén, čo bol vzorec podobný ako u hlavných chemikálií listového oleja, β-pinénu a α-pinénu (monoterpénové uhľovodíky). Na druhej strane, olej v mladých plodoch bol bohatý na bornylacetát a gáfor (oxygenované monoterpény). Výsledky boli podporené zisteniami Do N Dai [30,32] a Hui Ao [31], ktorí identifikovali oleje z rôznych orgánov A. villosum.
Existuje niekoľko správ o inhibičnej aktivite týchto hlavných zlúčenín na rast rastlín u iných druhov. Shalinder Kaur zistila, že α-pinén z eukalyptu výrazne potláča dĺžku koreňov a výšku výhonkov Amaranthus viridis L. pri koncentrácii 1,0 μl [43] a ďalšia štúdia ukázala, že α-pinén inhiboval skorý rast koreňov a spôsoboval oxidačné poškodenie koreňového tkaniva zvýšenou tvorbou reaktívnych foriem kyslíka [44]. Niektoré správy tvrdia, že β-pinén inhiboval klíčenie a rast sadeníc testovaných burín v závislosti od dávky narušením integrity membrány [45], čím sa mení biochémia rastlín a zvyšuje sa aktivita peroxidáz a polyfenoloxidáz [46]. β-Phellandrén vykazoval maximálnu inhibíciu klíčenia a rastu Vigna unguiculata (L.) Walp pri koncentrácii 600 ppm [47], zatiaľ čo pri koncentrácii 250 mg/m3 gáfor potlačil rast koreňov a výhonkov Lepidium sativum L. [48]. Výskum, ktorý by poukazoval na alelopatický účinok bornylacetátu, je však nedostatočný. V našej štúdii boli alelopatické účinky β-pinénu, bornylacetátu a gáfru na dĺžku koreňov slabšie ako u prchavých olejov, s výnimkou α-pinénu, zatiaľ čo olej z listov, bohatý na α-pinén, bol tiež fytotoxickejší ako zodpovedajúce prchavé oleje zo stoniek a plodov A. villosum, pričom obe zistenia naznačujú, že α-pinén by mohol byť dôležitou chemikáliou pre alelopatiu tohto druhu. Výsledky zároveň naznačujú, že niektoré zlúčeniny v oleji z plodov, ktoré neboli hojné, by mohli prispievať k vzniku fytotoxického účinku, čo je zistenie, ktoré si vyžaduje ďalší výskum v budúcnosti.Za normálnych podmienok je alelopatický účinok alelochemikálií druhovo špecifický. Jiang a kol. zistili, že esenciálny olej produkovaný rastlinou Artemisia sieversiana mal silnejší účinok na Amaranthus retroflexus L. ako na Medicago sativa L., Poa annua L. a Pennisetum alopecuroides (L.) Spreng. [49V inej štúdii mal prchavý olej z Lavandula angustifolia Mill. rôzne stupne fytotoxických účinkov na rôzne druhy rastlín. Lolium multiflorum Lam. bol najcitlivejším akceptorovým druhom, pričom rast hypokotylu a radikuly bol inhibovaný o 87,8 % a 76,7 % pri dávke 1 μl/ml oleja, ale rast hypokotylu sadeníc uhoriek bol sotva ovplyvnený [20Naše výsledky tiež ukázali, že medzi druhmi L. sativa a L. perenne existoval rozdiel v citlivosti na prchavé látky z A. villosum.Prchavé zlúčeniny a esenciálne oleje toho istého druhu sa môžu kvantitatívne a/alebo kvalitatívne líšiť v závislosti od podmienok rastu, častí rastliny a metód detekcie. Napríklad správa preukázala, že pyranoid (10,3 %) a β-karyofylén (6,6 %) boli hlavnými zlúčeninami prchavých látok emitovaných z listov Sambucus nigra, zatiaľ čo benzaldehyd (17,8 %), α-bulnesén (16,6 %) a tetrakosan (11,5 %) boli hojné v olejoch extrahovaných z listov [50V našej štúdii mali prchavé zlúčeniny uvoľňované z čerstvých rastlinných materiálov silnejšie alelopatické účinky na testované rastliny ako extrahované prchavé oleje, pričom rozdiely v reakcii úzko súviseli s rozdielmi v alelochemikáliách prítomných v týchto dvoch prípravkoch. Presné rozdiely medzi prchavými zlúčeninami a olejmi je potrebné ďalej skúmať v nasledujúcich experimentoch.Rozdiely v mikrobiálnej diverzite a štruktúre mikrobiálnych spoločenstiev vo vzorkách pôdy, do ktorých boli pridané prchavé oleje, súviseli s konkurenciou medzi mikroorganizmami, ako aj s akýmikoľvek toxickými účinkami a trvaním prítomnosti prchavých olejov v pôde. Vokou a Liotiri [51] zistili, že aplikácia štyroch esenciálnych olejov (0,1 ml) do obrábanej pôdy (150 g) aktivovala dýchanie vzoriek pôdy, dokonca aj oleje sa líšili v chemickom zložení, čo naznačuje, že rastlinné oleje sa používajú ako zdroj uhlíka a energie vyskytujúcimi sa pôdnymi mikroorganizmami. Údaje získané zo súčasnej štúdie potvrdili, že oleje z celej rastliny A. villosum prispeli k zjavnému nárastu počtu druhov pôdnych húb do 14. dňa po pridaní oleja, čo naznačuje, že olej môže poskytovať zdroj uhlíka pre viac pôdnych húb. Ďalšia štúdia uviedla zistenie: pôdne mikroorganizmy obnovili svoju pôvodnú funkciu a biomasu po dočasnom období variácie vyvolanom pridaním oleja Thymbra capitata L. (Cav), ale olej v najvyššej dávke (0,93 µl oleja na gram pôdy) neumožnil pôdnym mikroorganizmom obnoviť pôvodnú funkčnosť [52]. V súčasnej štúdii sme na základe mikrobiologickej analýzy pôdy po ošetrení rôznymi dňami a koncentráciami predpokladali, že pôdna bakteriálna komunita sa po viacerých dňoch obnoví. Naproti tomu hubová mikrobiota sa nemôže vrátiť do pôvodného stavu. Nasledujúce výsledky túto hypotézu potvrdzujú: zreteľný vplyv vysokej koncentrácie oleja na zloženie pôdneho hubového mikrobiómu bol odhalený analýzou hlavných súradníc (PCoA) a prezentácie tepelnej mapy opäť potvrdili, že zloženie hubovej komunity pôdy ošetrenej 3,0 mg/ml oleja (konkrétne 0,375 mg oleja na gram pôdy) na úrovni rodu sa značne líšilo od iných ošetrení. V súčasnosti je výskum účinkov pridania monoterpénových uhľovodíkov alebo okysličených monoterpénov na mikrobiálnu diverzitu a štruktúru pôdnej komunity stále obmedzený. Niekoľko štúdií uviedlo, že α-pinén zvyšuje mikrobiálnu aktivitu pôdy a relatívnu abundanciu Methylophilaceae (skupina metylotrofov, Proteobacteria) pri nízkom obsahu vlhkosti, pričom hrá dôležitú úlohu ako zdroj uhlíka v suchších pôdach [53]. Podobne, prchavý olej z celej rastliny A. villosum, obsahujúci 15,03 % α-pinénu (Doplnková tabuľka S1), zjavne zvýšil relatívnu abundanciu Proteobacteria pri 1,5 mg/ml a 3,0 mg/ml, čo naznačuje, že α-pinén pravdepodobne pôsobí ako jeden zo zdrojov uhlíka pre pôdne mikroorganizmy.Prchavé zlúčeniny produkované rôznymi orgánmi A. villosum mali rôzny stupeň alelopatických účinkov na L. sativa a L. perenne, čo úzko súviselo s chemickými zložkami, ktoré časti rastliny A. villosum obsahovali. Hoci chemické zloženie prchavého oleja bolo potvrdené, prchavé zlúčeniny uvoľňované A. villosum pri izbovej teplote nie sú známe a vyžadujú si ďalšie skúmanie. Okrem toho si zaslúži zváženie aj synergický účinok medzi rôznymi alelochemikáliami. Pokiaľ ide o pôdne mikroorganizmy, na komplexné preskúmanie vplyvu prchavého oleja na pôdne mikroorganizmy je potrebné vykonať hlbší výskum: predĺžiť čas pôsobenia prchavého oleja a rozpoznať zmeny v chemickom zložení prchavého oleja v pôde v rôzne dni. -
Čistý olej z Artemisia capillaris na výrobu sviečok a mydla, veľkoobchodný difuzér, esenciálny olej, nový pre difuzéry do dymových kahanov
Návrh modelu hlodavca
Zvieratá boli náhodne rozdelené do piatich skupín po pätnástich myšiach v každej skupine. Myšiam z kontrolnej a modelovej skupiny bola sondou podávanásezamový olejpočas 6 dní. Myšiam v pozitívnej kontrolnej skupine boli podávané tablety bifendátu (BT, 10 mg/kg) sondou počas 6 dní. Experimentálne skupiny boli liečené AEO rozpusteným v sezamovom oleji v dávke 100 mg/kg a 50 mg/kg počas 6 dní. Na 6. deň bol kontrolnej skupine podaný sezamový olej a všetkým ostatným skupinám bola podaná jednorazová dávka 0,2 % CCl4 v sezamovom oleji (10 ml/kg) počas...intraperitoneálna injekciaMyšiam sa potom podarilo vyhladovať a zbaviť ich vody a z retrobulbárnych ciev sa odobrali vzorky krvi; odobratá krv sa centrifugovala pri 3000-násobnej frekvencii.gpočas 10 minút, aby sa oddelilo sérum.Dislokácia krčnej chrbticesa vykonal ihneď po odbere krvi a vzorky pečene boli okamžite odstránené. Jedna časť vzorky pečene bola okamžite uskladnená pri teplote -20 °C až do analýzy a druhá časť bola vyrezaná a fixovaná v 10 %formalínroztok; zvyšné tkanivá boli uskladnené pri teplote -80 °C na histopatologickú analýzu (Wang a kol., 2008,Hsu a kol., 2009,Nie a kol., 2015).
Meranie biochemických parametrov v sére
Poškodenie pečene sa hodnotilo odhadomenzymatické aktivitysérovej ALT a AST s použitím zodpovedajúcich komerčných súprav podľa pokynov pre súpravy (Nanjing, provincia Jiangsu, Čína). Enzymatické aktivity boli vyjadrené v jednotkách na liter (U/l).
Meranie MDA, SOD, GSH a GSH-Pxv homogenátoch pečene
Tkanivá pečene boli homogenizované studeným fyziologickým roztokom v pomere 1:9 (hmotn./obj., pečeň:soľný roztok). Homogenáty boli centrifugované (2500 ×gpočas 10 minút) na zhromaždenie supernatantov na následné stanovenia. Poškodenie pečene sa hodnotilo podľa pečeňových meraní hladín MDA a GSH, ako aj SOD a GSH-P.xaktivity. Všetky tieto boli stanovené podľa pokynov na súprave (Nanjing, provincia Jiangsu, Čína). Výsledky pre MDA a GSH boli vyjadrené ako nmol na mg proteínu (nmol/mg prot) a aktivity SOD a GSH-Pxboli vyjadrené ako U na mg proteínu (U/mg prot.).
Histopatologická analýza
Časti čerstvo získanej pečene boli fixované v 10 % pufrovanomparaformaldehydroztok fosfátu. Vzorka bola potom zaliata do parafínu, nakrájaná na rezy s hrúbkou 3 – 5 μm a zafarbenáhematoxylínaeozín(H&E) podľa štandardného postupu a nakoniec analyzované pomocousvetelná mikroskopia(Tian a kol., 2012).
Štatistická analýza
Výsledky boli vyjadrené ako priemer ± štandardná odchýlka (SD). Výsledky boli analyzované pomocou štatistického programu SPSS Statistics, verzia 19.0. Dáta boli podrobené analýze rozptylu (ANOVA,p< 0,05), po ktorom nasledoval Dunnettov test a Dunnettov T3 test na určenie štatisticky významných rozdielov medzi hodnotami rôznych experimentálnych skupín. Za významný rozdiel sa považoval rozdiel na úrovnip< 0,05.
Výsledky a diskusia
Zložky AEO
Pri analýze GC/MS sa zistilo, že AEO obsahuje 25 zložiek eluovaných od 10 do 35 minút a identifikovaných bolo 21 zložiek, ktoré predstavujú 84 % esenciálneho oleja (Tabuľka 1). Prchavý olej obsiahnutýmonoterpenoidy(80,9 %), seskviterpenoidy (9,5 %), nasýtené nerozvetvené uhľovodíky (4,86 %) a rôznorodý acetylén (4,86 %). V porovnaní s inými štúdiami (Guo a kol., 2004), v AEO sme zistili hojné zastúpenie monoterpenoidov (80,90 %). Výsledky ukázali, že najhojnejšou zložkou AEO je β-citronellol (16,23 %). Medzi ďalšie hlavné zložky AEO patrí 1,8-cineol (13,9 %),gáfor(12,59 %),linalool(11,33 %), α-pinén (7,21 %), β-pinén (3,99 %),tymol(3,22 %) amyrcén(2,02 %). Zmena chemického zloženia môže súvisieť s podmienkami prostredia, ktorým bola rastlina vystavená, ako je minerálna voda, slnečné svetlo, štádium vývoja avýživa.
-
Čistý olej Saposhnikovia divaricata na výrobu sviečok a mydla, veľkoobchodný difuzér, nový esenciálny olej do difuzérov do dymových kahanov
2.1. Príprava SDE
Oddenky SD boli zakúpené ako sušená bylina od spoločnosti Hanherb Co. (Guri, Kórea). Rastlinný materiál bol taxonomicky potvrdený Dr. Go-Ya Choiom z Kórejského inštitútu orientálnej medicíny (KIOM). Vzorka poukážky (číslo 2014 SDE-6) bola uložená v kórejskom herbáriu štandardných bylinných zdrojov. Sušené oddenky SD (320 g) boli dvakrát extrahované 70 % etanolom (s 2-hodinovým refluxom) a extrakt bol potom zahustený za zníženého tlaku. Odvar bol prefiltrovaný, lyofilizovaný a skladovaný pri 4 °C. Výťažok sušeného extraktu zo surových východiskových materiálov bol 48,13 % (hmotn./hmotn.).
2.2. Kvantitatívna analýza vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou (HPLC)
Chromatografická analýza sa uskutočnila pomocou HPLC systému (Waters Co., Milford, MA, USA) a detektora s fotodiódovým poľom. Pre HPLC analýzu SDE sa použili primárne...O-štandard glukozylcimifugínu bol zakúpený od Kórejského propagačného inštitútu pre tradičný medicínsky priemysel (Gyeongsan, Kórea) asek-O-glukozylhamaudol a 4′-O-β-D-glukozyl-5-O-metylvisaminol boli izolované v našom laboratóriu a identifikované spektrálnymi analýzami, predovšetkým NMR a MS.
Vzorky SDE (0,1 mg) boli rozpustené v 70 % etanole (10 ml). Chromatografická separácia bola vykonaná na kolóne XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). Mobilná fáza pozostávala z acetonitrilu (A) a 0,1 % kyseliny octovej vo vode (B) pri prietoku 1,0 ml/min. Použil sa viacstupňový gradientový program nasledovne: 5 % A (0 min), 5 – 20 % A (0 – 10 min), 20 % A (10 – 23 min) a 20 – 65 % A (23 – 40 min). Detekčná vlnová dĺžka bola skenovaná pri 210 – 400 nm a zaznamenávaná pri 254 nm. Vstrekovaný objem bol 10,0μL. Štandardné roztoky na stanovenie troch chromónov boli pripravené s konečnou koncentráciou 7,781 mg/ml (prim-O-glukozylcimifugín), 31,125 mg/ml (4′-O-β-D-glukozyl-5-O-metylvisaminol) a 31,125 mg/ml (sek-O-glukozylhamaudol) v metanole a uchovávaný pri teplote 4 °C.
2.3. Hodnotenie protizápalovej aktivityIn vitro
2.3.1. Bunková kultúra a úprava vzorky
Bunky RAW 264.7 boli získané z Americkej zbierky typových kultúr (ATCC, Manassas, VA, USA) a pestované v médiu DMEM obsahujúcom 1 % antibiotík a 5,5 % FBS. Bunky boli inkubované vo vlhkej atmosfére s 5 % CO2 pri teplote 37 °C. Na stimuláciu buniek bolo médium nahradené čerstvým médiom DMEM a lipopolysacharidom (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) pri 1 °C.μg/ml sa pridal v prítomnosti alebo neprítomnosti SDE (200 alebo 400μg/ml) počas ďalších 24 hodín.
2.3.2. Stanovenie oxidu dusnatého (NO), prostaglandínu E2 (PGE2), faktora nekrózy nádorovα(TNF-α) a produkcia interleukínu-6 (IL-6)
Bunky boli ošetrené SDE a stimulované LPS počas 24 hodín. Produkcia NO bola analyzovaná meraním dusitanov pomocou Griessovho činidla podľa predchádzajúcej štúdie [12]. Sekrécia zápalových cytokínov PGE2, TNF-αa IL-6 sa stanovil pomocou súpravy ELISA (R&D systems) podľa pokynov výrobcu. Účinky SDE na produkciu NO a cytokínov sa stanovili pri 540 nm alebo 450 nm pomocou prístroja Wallac EnVision.™čítačka mikroplatničiek (PerkinElmer).
2.4. Hodnotenie antiosteoartritickej aktivityIn vivo
2.4.1. Zvieratá
Samce potkanov kmeňa Sprague-Dawley (vo veku 7 týždňov) boli zakúpené od spoločnosti Samtako Inc. (Osan, Kórea) a chované v kontrolovaných podmienkach s 12-hodinovým cyklom svetlo/tma pri°C a% vlhkosti. Potkanom bola poskytnutá laboratórna strava a vodaad libitumVšetky experimentálne postupy boli vykonané v súlade s pokynmi Národných inštitútov zdravia (NIH) a schválené Výborom pre starostlivosť o zvieratá a ich používanie Univerzity v Daejeone (Daejeon, Kórejská republika).
2.4.2. Indukcia osteoartrózy s MIA u potkanov
Zvieratá boli pred začiatkom štúdie náhodne rozdelené a zaradené do liečebných skupín (na skupinu). Roztok MIA (3 mg/50μ1 l 0,9% fyziologického roztoku) bol priamo injekčne podaný do intraartikulárneho priestoru pravého kolena v anestézii vyvolanej zmesou ketamínu a xylazínu. Potkany boli náhodne rozdelené do štyroch skupín: (1) skupina s fyziologickým roztokom bez injekcie MIA, (2) skupina s MIA s injekciou MIA, (3) skupina liečená SDE (200 mg/kg) s injekciou MIA a (4) skupina liečená indometacínom (IM) (2 mg/kg) s injekciou MIA. Potkanom bol perorálne podávaný SDE a IM 1 týždeň pred injekciou MIA počas 4 týždňov. Dávkovanie SDE a IM použité v tejto štúdii bolo založené na dávkovaní použitom v predchádzajúcich štúdiách [10,13,14].
2.4.3. Merania rozloženia hmotnosti zadných labiek
Po indukcii osteoartrózy (OA) bola pôvodná rovnováha v nosnej schopnosti zadných labiek narušená. Na vyhodnotenie zmien v tolerancii nosenia bol použitý tester inkapacitancie (Linton Instrumentation, Norfolk, Spojené kráľovstvo). Potkany boli opatrne umiestnené do meracej komory. Sila nosenia vyvíjaná zadnou končatinou bola spriemerovaná počas 3 sekúnd. Pomer rozloženia hmotnosti bol vypočítaný pomocou nasledujúcej rovnice: [hmotnosť na pravej zadnej končatine / (hmotnosť na pravej zadnej končatine + hmotnosť na ľavej zadnej končatine)] × 100 [15].
2.4.4. Merania hladín cytokínov v sére
Vzorky krvi sa centrifugovali pri 1 500 g počas 10 minút pri teplote 4 °C; potom sa odobralo sérum a uskladnilo pri teplote -70 °C až do použitia. Hladiny IL-1β, IL-6, TNF-α, a PGE2 v sére boli merané pomocou ELISA súprav od spoločnosti R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) podľa pokynov výrobcu.
2.4.5. Kvantitatívna RT-PCR analýza v reálnom čase
Celková RNA bola extrahovaná z tkaniva kolenného kĺbu pomocou TRI reagentu® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), reverzne transkribovaná do cDNA a amplifikovaná PCR pomocou súpravy TM One Step RT PCR so SYBR green (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Kvantitatívna PCR v reálnom čase bola vykonaná pomocou systému Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Sekvencie primerov a sekvencia sondy sú uvedené v tabuľke.1Alikvóty vzorky cDNA a rovnaké množstvo cDNA GAPDH boli amplifikované pomocou TaqMan® Universal PCR master mixture obsahujúcej DNA polymerázu podľa pokynov výrobcu (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). Podmienky PCR boli 2 minúty pri 50 °C, 10 minút pri 94 °C, 15 sekúnd pri 95 °C a 1 minúta pri 60 °C počas 40 cyklov. Koncentrácia cieľového génu bola stanovená pomocou porovnávacej metódy Ct (prahový počet cyklov v bode kríženia medzi amplifikačným grafom a prahom) podľa pokynov výrobcu.
