Čistý olej Saposhnikovia divaricata na výrobu sviečok a mydla, veľkoobchodný difuzér, nový esenciálny olej do difuzérov do dymových kahanov

krátky popis:

 

2.1. Príprava SDE

Oddenky SD boli zakúpené ako sušená bylina od spoločnosti Hanherb Co. (Guri, Kórea). Rastlinný materiál bol taxonomicky potvrdený Dr. Go-Ya Choiom z Kórejského inštitútu orientálnej medicíny (KIOM). Vzorka poukážky (číslo 2014 SDE-6) bola uložená v kórejskom herbáriu štandardných bylinných zdrojov. Sušené oddenky SD (320 g) boli dvakrát extrahované 70 % etanolom (s 2-hodinovým refluxom) a extrakt bol potom zahustený za zníženého tlaku. Odvar bol prefiltrovaný, lyofilizovaný a skladovaný pri 4 °C. Výťažok sušeného extraktu zo surových východiskových materiálov bol 48,13 % (hmotn./hmotn.).

 

2.2. Kvantitatívna analýza vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou (HPLC)

Chromatografická analýza sa uskutočnila pomocou HPLC systému (Waters Co., Milford, MA, USA) a detektora s fotodiódovým poľom. Pre HPLC analýzu SDE sa použili primárne...O-štandard glukozylcimifugínu bol zakúpený od Kórejského propagačného inštitútu pre tradičný medicínsky priemysel (Gyeongsan, Kórea) asek-O-glukozylhamaudol a 4′-O-β-D-glukozyl-5-O-metylvisaminol boli izolované v našom laboratóriu a identifikované spektrálnymi analýzami, predovšetkým NMR a MS.

Vzorky SDE (0,1 mg) boli rozpustené v 70 % etanole (10 ml). Chromatografická separácia bola vykonaná na kolóne XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). Mobilná fáza pozostávala z acetonitrilu (A) a 0,1 % kyseliny octovej vo vode (B) pri prietoku 1,0 ml/min. Použil sa viacstupňový gradientový program nasledovne: 5 % A (0 min), 5 – 20 % A (0 – 10 min), 20 % A (10 – 23 min) a 20 – 65 % A (23 – 40 min). Detekčná vlnová dĺžka bola skenovaná pri 210 – 400 nm a zaznamenávaná pri 254 nm. Vstrekovaný objem bol 10,0.μL. Štandardné roztoky na stanovenie troch chromónov boli pripravené s konečnou koncentráciou 7,781 mg/ml (prim-O-glukozylcimifugín), 31,125 mg/ml (4′-O-β-D-glukozyl-5-O-metylvisaminol) a 31,125 mg/ml (sek-O-glukozylhamaudol) v metanole a uchovávaný pri teplote 4 °C.

2.3. Hodnotenie protizápalovej aktivityIn vitro

2.3.1. Bunková kultúra a úprava vzorky

Bunky RAW 264.7 boli získané z Americkej zbierky typových kultúr (ATCC, Manassas, VA, USA) a pestované v médiu DMEM obsahujúcom 1 % antibiotík a 5,5 % FBS. Bunky boli inkubované vo vlhkej atmosfére s 5 % CO2 pri teplote 37 °C. Na stimuláciu buniek bolo médium nahradené čerstvým médiom DMEM a lipopolysacharidom (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) pri 1 °C.μg/ml sa pridal v prítomnosti alebo neprítomnosti SDE (200 alebo 400μg/ml) počas ďalších 24 hodín.

2.3.2. Stanovenie oxidu dusnatého (NO), prostaglandínu E2 (PGE2), faktora nekrózy nádorovα(TNF-α) a produkcia interleukínu-6 (IL-6)

Bunky boli ošetrené SDE a stimulované LPS počas 24 hodín. Produkcia NO bola analyzovaná meraním dusitanov pomocou Griessovho činidla podľa predchádzajúcej štúdie [12]. Sekrécia zápalových cytokínov PGE2, TNF-αa IL-6 sa stanovil pomocou súpravy ELISA (R&D systems) podľa pokynov výrobcu. Účinky SDE na produkciu NO a cytokínov sa stanovili pri 540 nm alebo 450 nm pomocou prístroja Wallac EnVision.™čítačka mikroplatničiek (PerkinElmer).

2.4. Hodnotenie antiosteoartritickej aktivityIn vivo

2.4.1. Zvieratá

Samce potkanov kmeňa Sprague-Dawley (vo veku 7 týždňov) boli zakúpené od spoločnosti Samtako Inc. (Osan, Kórea) a chované v kontrolovaných podmienkach s 12-hodinovým cyklom svetlo/tma pri°C a% vlhkosti. Potkanom bola poskytnutá laboratórna strava a vodaad libitumVšetky experimentálne postupy boli vykonané v súlade s pokynmi Národných inštitútov zdravia (NIH) a schválené Výborom pre starostlivosť o zvieratá a ich používanie Univerzity v Daejeone (Daejeon, Kórejská republika).

2.4.2. Indukcia osteoartrózy s MIA u potkanov

Zvieratá boli pred začiatkom štúdie náhodne rozdelené a zaradené do liečebných skupín (na skupinu). Roztok MIA (3 mg/50μ1 l 0,9% fyziologického roztoku) bol priamo injekčne podaný do intraartikulárneho priestoru pravého kolena v anestézii vyvolanej zmesou ketamínu a xylazínu. Potkany boli náhodne rozdelené do štyroch skupín: (1) skupina s fyziologickým roztokom bez injekcie MIA, (2) skupina s MIA s injekciou MIA, (3) skupina liečená SDE (200 mg/kg) s injekciou MIA a (4) skupina liečená indometacínom (IM) (2 mg/kg) s injekciou MIA. Potkanom bol perorálne podávaný SDE a IM 1 týždeň pred injekciou MIA počas 4 týždňov. Dávkovanie SDE a IM použité v tejto štúdii bolo založené na dávkovaní použitom v predchádzajúcich štúdiách [10,13,14].

2.4.3. Merania rozloženia hmotnosti zadných labiek

Po indukcii osteoartrózy (OA) bola pôvodná rovnováha v nosnej schopnosti zadných labiek narušená. Na vyhodnotenie zmien v tolerancii nosenia bol použitý tester inkapacitancie (Linton Instrumentation, Norfolk, Spojené kráľovstvo). Potkany boli opatrne umiestnené do meracej komory. Sila nosenia vyvíjaná zadnou končatinou bola spriemerovaná počas 3 sekúnd. Pomer rozloženia hmotnosti bol vypočítaný pomocou nasledujúcej rovnice: [hmotnosť na pravej zadnej končatine / (hmotnosť na pravej zadnej končatine + hmotnosť na ľavej zadnej končatine)] × 100 [15].

2.4.4. Merania hladín cytokínov v sére

Vzorky krvi sa centrifugovali pri 1 500 g počas 10 minút pri teplote 4 °C; potom sa odobralo sérum a uskladnilo pri teplote -70 °C až do použitia. Hladiny IL-1β, IL-6, TNF-α, a PGE2 v sére boli merané pomocou ELISA súprav od spoločnosti R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) podľa pokynov výrobcu.

2.4.5. Kvantitatívna RT-PCR analýza v reálnom čase

Celková RNA bola extrahovaná z tkaniva kolenného kĺbu pomocou TRI reagentu® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), reverzne transkribovaná do cDNA a amplifikovaná PCR pomocou súpravy TM One Step RT PCR so SYBR green (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Kvantitatívna PCR v reálnom čase bola vykonaná pomocou systému Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Sekvencie primerov a sekvencia sondy sú uvedené v tabuľke.1Alikvóty vzorky cDNA a rovnaké množstvo cDNA GAPDH boli amplifikované pomocou TaqMan® Universal PCR master mixture obsahujúcej DNA polymerázu podľa pokynov výrobcu (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). Podmienky PCR boli 2 minúty pri 50 °C, 10 minút pri 94 °C, 15 sekúnd pri 95 °C a 1 minúta pri 60 °C počas 40 cyklov. Koncentrácia cieľového génu bola stanovená pomocou porovnávacej metódy Ct (prahový počet cyklov v bode kríženia medzi amplifikačným grafom a prahom) podľa pokynov výrobcu.

Cena FOB:0,5 – 9 999 USD/kus

Minimálne množstvo objednávky:100 kusov

Schopnosť dodávky:10 000 kusov/kusov mesačne